Hlavní nabídka
Stroje
Počítadlo
Celkem 90066
Červen 5953
Dnes 1
Online 1

LSR II

 

Centrum pro cytometrii a mikroskopii MBÚ AV ČR je vybaveno 16-ti barevným průtokovým cytometrem BD LSRII včetně FACS Flow Supply Systému a High Throughput Sampleru.

Přístroj byl modifikován Dr. Horváthem (Flow Cytometry and Microscopy facility of IMG) pro 4 excitační zdroje:

 

Hardwarová konfigurace

 

1. Optická část

405nm, 100mW - OBIS solid state (70mW regulovaně)

488nm, 20mW - Coherent Sapphire 488-20 DPSS laser

561nm, 25mW - Melles Griot 85-YCA-025

633nm, 17mW - JDS Uniphase 1144P He-Ne laser

 

 

Fialový laser, 405nm, 6 fotodetektorů

 

Modrý laser, 488nm, 4 fotodetektory

 

Žlutý laser, 561nm, 6 fotodetektorů

Červený laser, 633nm, 3 fotodetektory

 

K dispozici je sada optických filtrů a zrcadel umožňujících co nejširší využití přístroje podle požadavků uživatele.

Emisní filtry Dichroická zrcadla
425/20440 LP
450/50475 LP
488/10505 LP
525/50545 LP
530/30550 LP
560/10565 LP
560/20575 LP
575/15590 LP
575/26595LP
585/15600 LP
585/42630 LP
605/12635 LP
610/20650 LP
655/8658 LP
660/16675 LP
660/20680 LP
670/14685 LP
675/20710 LP
675/45735 LP
685/35755 LP
695/20
695/40
705/20
712/21
725/20
750/60
780/60
705/20

 

 

 

 

2. High Throughput Sampler (HTS)

HTS je zařízení, které umožňuje automatické měření vzorků průtokovým cytometrem přímo z 96 nebo 384 jamkových desek.

Zařízení se skládá ze dvou základních částí:

  1. pohyblivého ramene s jehlou, které obstarává míchání a manipulaci se vzorky, míchání buněk v jamkách, nasátí a injektáž vzorku do cytometru.

  2. pohyblivý stolek pro destičky.

Podrobný manuál k HTS (PDF)

3. Ovládací software:

BD FACS DiVa 6

Obsluha přístroje:

1. Zapnutí

1. KROK: Před zapnutím přístroje zkontrolujte hladiny kapalin v nádobách FACS Flow Supply Systemu (FFSS).

Sheath kanystr nesmí být nikdy prázdný, dochází k zavzdušnění přístroje, které pak přináší dlouhodobou nestabilitu systému a znehodnocuje naměřená data.

2. KROK: Přístroj se uvádí do provozu stisknutím zeleného tlačítka na pravé straně čelního panelu přístroje.

3. KROK: Po zapnutí LSRII spusťte ovládací program FACS DiVa, po přihášení do programu se otevře výchozí sestava oken.

Počkejte až dojde k připojení cytometru k počítači. O stavu připojení jste informováni ikonou v pravém dolním rohu.

Než začnete měřit, nechte přístroj cca 10min stabilizovat.

2. Provoz

Vlastní obsluha LSRII je řízena tlačítky na čelním panelu přístroje.

Fluidními ovladači Lo, Med a Hi regulujeme rychlost nasávání vzorku, ovladač Sample Fine Adj slouží k jemnému doladění průtoku..

Tyto ovladače jsou funkční pouze při práci se zkumavkami, při práci s HTS je rychlost nasávání vzorku nastavována softwarově.

Orientační průtoky:

Rozsah (ul/min) Střed (ul/min)
Low 6 - 24 12
Medium 18 - 70 35
High 30 - 120 60

Tlačítkem Run spustíte nasávání vzorku přístrojem. V tomto módu neustále protéká přístrojem kapalina. Přístroj se do stavu Run přepíná pouze během měření.

Standby je pohotovostní režim. Do tohoto režimu uveďte přístroj vždy po u končení měření.

Prime slouží k pročištění měřící komory.

FACS Flow Supply System (FFSS)

FFSS je systém zajišťující průtok a stálý tlak nosné kapaliny v průtokovém cytometru. Systém se skládá z kontrolního panelu a dvou nádob.

Spouští se zapnutím průtokového cytometru. Vypínač na pravé straně ovládacího panelu zůstává stale zapnutý, svítí zelená kontrolka "System on".

Levá nádoba (PE kanystr) je určena na sheath fluid = nosnou kapalinu. PBS naředíte z 10 x koncentrovaného zásobního roztoku (1 litr 10 x PBS + 9 litrů deionizované H2O)

Pravá nádoba je odpadní, při vyprázdnění přidáme cca 100ml SAVA.

Pokud během měření dojde Sheath fluid, případně dojde k naplnění odpadní nádoby spustí FFSS zvukovou signalizaci. Na čelním panelu se rozsviti červená kontrolka, která nás informuje o příčině alarmu.

Pískot musíte vypnout stiskem talčítka alarm, přepněte FACS na Standby, doplňte/vylijte tekutiny

!!!!!!!!!!!!!!! STISKNĚTE RESTART !!!!!!!!!!!!!!!

- zhasne červená kontrolka, přepněte FACS na Run a pokračujte v měření.

High Throughput Sampler (HTS)

HTS umístíte na stojan a lehce zasunete do cytometru. Při instalaci je třeba sledovat aby nedošlo k poškození nasávací jehly, nebo k uskřípnutí hadiček.

Připojte fluidní system:

  1. Bílá hadička s bílými konektory SHEATH (B), oranžová hadička s oranžovými konektory WASTE (A).
  2. Nasaďte Sample Tubing na jehlu, OPATRŇE A ZLEHKA dotáhněte.
  3. Propojte elektroniku přístrojů pomocí RS232 konektoru a napájení zařízení.
  4. Zapněte zařízení vypínačem umístěným na pravé straně přístroje, rozsvítí se zelená dioda.
  5. Na LSRII přepněte nasávání vzorku ze zkumavky na nasávání z destičky.
  6. Komunikaci mezi DIVA softwarem a HTS obstarává HTS menu v DIVA softwaru.

    Před vlastním měřením je vhodné HTS proprat. Přepněte LSR II ze StandBy modu do stavu Run a v HTS menu DIVA softwaru klikneme na ikonu Prime.

    O ukončení cyklu přístroj informuje akusticky a softwarově.

  7. Pokud jste provedli všechny předchozí kroky a zkontrolovali nastavení přístroje, můžete zahájit měření.

3. Vypnutí přístroje

Vyexportujte si naměřená data.  DATA STARŠÍ 6 MĚSÍCŮ JSOU MAZÁNA.

Pokud jste používali jinou než standardní konfiguraci filtrů a zrcadel, vráťte přístroj do standardní konfigurace.

Po ukončení měření je třeba proprat HTS jednotku

Připravte 96 jamkovou U desku:

  1. do pozice A1-A4 přidejte po 200ul 10% SAVO
  2. do pozice B1-B4 přidejte 200 ul deionizované vody

Instalujte desku na HTS a z HTS menu DIVA softwaru spusťte "HTS daily clean" čistící program.

Celá procedura trvá cca 10min. O jejím ukončení budete informováni softwarově a akusticky.

Po práci ve zkumavkách přepněte LSR do HIGH modu a nasaďte zkumavku s 10% SAVEM, kterou po 2 minutách vyměnte za zkumavku s deionizovanou vodou kterou necháte přístroj propírat také 2 minuty. Po té nasaďte zkumavku s 2ml deionizované vody a přepněte LSRII do Standby modu.

 

 

 

Tento web site byl vytvořen prostřednictvím phpRS - redakčního systému napsaného v PHP jazyce. Na této stránce použité názvy programových produktů, firem apod. mohou být ochrannými známkami nebo registrovanými ochrannými známkami příslušných vlastníků.

Web site powered by phpRS PHP Scripting Language MySQL Apache Web Server